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KLH偶聯(lián)方法
我們用MBS活化KLH,這樣能將載體蛋白(KLH)上面的自由-SH與多肽末端的Cys的側(cè)鏈-SH連接起來,這種方法直接,特異性高,而且穩(wěn)定,通常選擇對免疫不重要的一端進(jìn)行交聯(lián)。 EDC活化載體上的-COOH,將載體的-COOH和多肽的-NH2連接起來也是一種可行的方法。但我們只建議在多肽序列中有多個Cys時采用該方法。如果肽鏈中含有多個-COOH或-NH2基因,不建議使用該方法,因為會造成多重點交聯(lián)的情況,使多肽結(jié)構(gòu)受影響。常用載體蛋白除KLH外,還有BSA,OVA等,KLH的優(yōu)勢是它不干擾ELISA或Western Blot等實驗。
KLH偶聯(lián)溶液混濁的原因
KLH是一個很大的并且聚合的蛋白。因為它的結(jié)構(gòu)和大小,它在水中的溶解度是很有限的,因此是乳狀,這并不影響它的免疫性,這種混濁的溶液可以直接免疫動物。
多肽偶聯(lián)蛋白
對在動物體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)而言,大多數(shù)多肽的分子量都太小。將多肽與載體蛋白如KLH等偶聯(lián)之后,不僅能增加抗原的大小,也能增強免疫性。我們可以提供與KLH,BSA和OVA蛋白的偶聯(lián)。大多數(shù)客戶選擇與KLH交聯(lián),因為KLH的免疫性更好,而且BSA在很多實驗中作為Blocking試劑,由于動物體內(nèi)既會產(chǎn)生對多肽的抗體也會產(chǎn)生對載體蛋白的抗體,這樣會出現(xiàn)假陽性。
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